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NK细胞数量和纯度再创新高,威斯尼斯人wns8888彰显细胞制备领域“隐形冠军”领导力

发布时间:2024/07/23
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NK细胞无需抗原预先致敏,即可快速反应并同时激活免疫系统来协同发挥杀伤作用,堪称免疫细胞里的航空母舰。科学家对NK细胞疗法也寄予厚望,全球的NK细胞相关疗法也在如火如荼的进行着。如何高效利用NK细胞帮助我们战胜疾病,科学家们为此一直在努力着,而提高NK细胞的纯度,便得以达到更好的治疗效果。



Fig1:NK 细胞的来源


细胞疗法在临床肿瘤治疗上的颠覆性成功显示其巨大的潜力。而NK细胞是杀伤肿瘤细胞的重要效应因子,随着科学家的不断探索和研究,它的应用也越来越受到关注。由于NK细胞不受MHC限制,故其不会引起移植物抗宿主病的优点被广受青睐。再者由iPSC分化而来NK细胞还可以实现批量化生产,提高生产效率。这使得NK细胞成为开发“现货型免疫疗法”的高潜力细胞。


技术与产品持续创新与突破


在对NK细胞不断的探索中,细胞的表型和功能鉴定是不可或缺的关键步骤。譬如,获取足够数量、高纯度且高活力的NK细胞是保证治疗效果的关键,2023年3月1日,威斯尼斯人wns8888针对NK细胞的纯度进行差异化创新产品,截止2024年1月12日,其纯度可达到99%。培养详细进程如下:


细胞培养


培养室验室外部照片实拍:



培养过程的照片:



图片标注:NK细胞培养的第三天,显微镜下的细胞生长分布,密度情况。


NK近99%纯度报告:



图片标注:通过第三方流式检测后的报告,NK细胞标志物CD3-CD56+显示达到了97.41%。


关于提纯和培养:

提取PBMC


NK细胞的培养是从人体的外周血单个核细胞PBMC(Peripheral Blood Mononuclear Cell)开始的,而PBMC需要从健康人的血液中尽快进行处理并分离提取。采血使用的是肝素钠采血管,我们需取约40-50ml血液进行一份NK细胞的培养,也会按献血人的年龄、身体情况等不同有区别,一般在采血后送达实验室,实验室便进行处理。脐血CBMC(Cord Blood Mononuclear Cell)可通过采血袋进行采集。我们处理血液分离细胞使用的是Ficoll®梯度离心分离法,另外灭活并保存血浆。



培养概述


本实验室通过接近17天的培养流程将约5kw的PBMC培养成1m/ml的NK细胞约2600ml。全程使用的是进口培养基、试剂,进口耗材。在PBMC分离后,用生理盐水重悬,取少量细胞进行计数,使用约3*10^7 - 5*10^7进行以下处理。如有剩余可另行冻存。


制备使用的培养基。培养细胞时培养基的选择至关重要,我们采用的是进口的无血清免疫细胞培养基,里面包含的营养成分足够在正常培养条件下促进细胞生长与扩增。细胞培养基中加入的刺激剂可诱导NK细胞的增值与分化。同时我们所添加的试剂因子可提高NK细胞的杀伤作用和活性。



取在培养步骤用包被液包被并保存在4°24h的T75瓶,弃包被液,用9ml加入了激活的培养基重悬细胞,1ml自体灭活血浆和保密试剂,放入培养箱37,5%CO2浓度培养。之后隔天观察,并在细胞处于可处理的状态时,及达到理想的扩增密度约为1-2*10^6/ml时,可加液补充。


培养过程中,当液体体积与密度到达可换T175瓶时从原本的T75瓶内转出,再正常培养;之后在液体体积到达可换培养袋时将细胞及液体转入。


在Day18左右,NK细胞达到理想的数量时(可取少量细胞悬液进行计数)可进行离心收集,并检测细胞悬液NK细胞含量成分及纯度。


上图报告为2023年3月的一次NK细胞培养Day18时送至第三方流式检测形成的细胞类型分布。本案例中我们可以看到NK细胞标记物CD3-CD56+(97.41%),达到了近99%的培养水平。时至今日,除了NK细胞的制备,TILs细胞在此基础上更进行迭代更新,新的数据显示tils现可制备1200亿-2400亿, 再创新高。



据威斯尼斯人wns8888创始人刘天津介绍,TIL疗法已在治疗宫颈癌、子宫内膜癌、黑色素瘤、胆管细胞癌、卵巢癌、胰腺癌等临床试验中取得令人可喜的疗效数据。TIL疗法是一个适应症覆盖面非常广的疗法,对于多种类型的实体肿瘤都能产生不错疗效。而威斯尼斯人wns8888新型的DC-TIL疗法将突破传统制备上的细胞数量,利用新型诱导技术和激活方式让战斗的细胞数值达到2400亿单位量。


TIL疗法治疗实体瘤



TIL疗法在实体瘤中取得的疗效基于其具有优势:


  • 靶向性强:来自于肿瘤组织的TIL主要由效应记忆T细胞(Tem)组成,表面表达的趋化因子受体(如CCR5、CXCR3)联合多种肿瘤特异性TCR,在TIL输注后,可以准确靶向肿瘤新生抗原;

  • 肿瘤浸润能力强:TIL细胞来自肿瘤,肿瘤趋化因子受体高表达,合适的趋化因子受体系统,使得TIL回输后可更好地浸润肿瘤组织;

  • 安全窗口高:天然TCR识别,耐受高达10E11级的回输剂量,安全窗口非常宽,仅识别肿瘤细胞抗原,不会靶向自身正常细胞,临床上显示良好的安全性;

  • 疗效持久:TIL细胞中记忆性T细胞比例高,是非选择的肿瘤特异性杀伤T细胞,靶向多种抗原,可克服因靶点丢失引起的复发问题。2012年接受TIL疗法的幸存者Melinda,目前已成功存活11年。


技术创新对突破TIL疗法 技术壁垒极为重要


威斯尼斯人wns8888的科学家们为了在鱼龙混杂的体系之中提纯出NK细胞进行了数十年的研究,但各种方法都存在自己的优越性以及局限性,这就需要我们学会理性分析自己的需求特点,选择合适的提纯方案,并在实践中不断优化和改进技术。我国的NK细胞疗法起步虽然略慢,但是我们充分利用了产业模式以及广纳新的科学技术,发展出许多NK细胞提纯的平台,为我国NK细胞相关研究和应用保驾护航。在疫情阴霾完全散去的今天,我国的免疫治疗领域正如NK细胞本身一样,在监管反应和协同方面同时发力,为战胜疾病贡献自己的力量。


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